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当前 MST 次

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北美山区标准时间

MST 时间

MST (北美山区标准时间) 是UTC-7时区的知名名称之一，比UTC（协调世界时)落后7个小时与UTC的时间偏差可写为-07:00.它在冬天使用。在夏季，MDT - 北美山区夏令时间 (UTC-6)正在使用中。有些地方全年使用MST 。

GMT偏移 - 当地时间与GMT的差别

7 hours behind (UTC-07)

其他名为 MST时区

缩写

名称

MST

Malaysia Standard Time

相关时区

MDT - 北美山区夏令时间, 

MT - 北美山区时间

IANA时区当前观察到 MST

America/Boise

America/Cambridge_Bay

America/Creston

America/Dawson

America/Dawson_Creek

America/Denver

America/Edmonton

America/Fort_Nelson

America/Hermosillo

America/Inuvik

America/Mazatlan

America/Phoenix

America/Whitehorse

America/Yellowknife

UTC-07其他时区

缩写

名称

PDT

北美太平洋夏令时间

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What is 北美山区标准时间: abbreviation, main facts, offsets, and other information about the time zone.

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MST时间与北京时间换算

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-7山区标准时间(MST)=UTC- 07:0018:07:54Tuesday, March 5, 20248北京(Beijing)时间=UTC+ 8:0009:07:54Wednesday, March 6, 2024山区标准时间(MST)与北京(Beijing)时间对照表山区标准时间(MST)北京时间(Beijing)00:0015:0001:0016:0002:0017:0003:0018:0004:0019:0005:0020:0006:0021:0007:0022:0008:0023:0009:0000:00+1天10:0001:00+1天11:0002:00+1天12:0003:00+1天13:0004:00+1天14:0005:00+1天15:0006:00+1天16:0007:00+1天17:0008:00+1天18:0009:00+1天19:0010:00+1天20:0011:00+1天21:0012:00+1天22:0013:00+1天23:0014:00+1天MST(山区标准时间)山区标准时间(MST)比世界协调时间(UTC)晚07:00小时。该时区为标准时区时间，主要用于 北美MST(山区标准时间) 代表城市加拿大 - 埃德蒙顿（冬季）美国 - 凤凰城（全年）Beijing(北京)北京位于中国，官方语言是中文，货币是人民币 (CNY)。中国的国际区号是86。

北京所属时区为中国标准时间(缩略语:CST)。

时间快速转换

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为什么好多数学老师不喜欢mst，无论是校内老师，补课班老师？ - 知乎

为什么好多数学老师不喜欢mst，无论是校内老师，补课班老师？ - 知乎首页知乎知学堂发现等你来答​切换模式登录/注册教师大学教师高中教师数学老师初中教师为什么好多数学老师不喜欢mst，无论是校内老师，补课班老师？关注者43被浏览349,394关注问题​写回答​邀请回答​好问题​添加评论​分享​21 个回答默认排序匿名用户纵观mst的编写者，就算你在省市重点学校的最高班级，你的老师水平和他们也相差甚远，这容易引起老师的妒忌，所以他们不喜欢mst。一派胡言。mst的核心是"高观点低运算"，满分突破系列书籍分模块探究数学知识的本质联系和高端解题方法，以及各种连从教多年的老教师们都闻所未闻的模型和解题思路，从而达到秒天秒地秒空气的效果。反观高考，作为全国范围内多省市的选拔考试，高考的考察落脚点要兼顾所有考生，创造合适的区分度，正常全国卷的难度剃度中中等题及以下占80%左右 ，而那一部分题目mst基本上没有帮助 。剩下20%的题目 由于高考难题的着力点大多聚焦基础方法与思想的综合运用，高观点的方法不一定有效果 。一般来说 只有选择题的后两题和填空题的压轴题才可能有所帮助。除此之外对于大题来说，通性通法yyds.用mst上的秒杀方法会让你的过程十分极其严重。你要问你写错了么？没写错，但老师就是不给分，不信去问你老师。高考要考察你的数学素养，数学素养最直观的体现在大题的解题过程中。举个例子，解析几何的目的就是考察考生计算能力，你用什么参数方程，极坐标，三角换元什么的快速解题，留下改卷老师一脸懵。要是你用的方法老师都不知道，呵呵，拿个答案分就知足吧。你要知道高考给的答案都是通性通法，老师改卷大多按答案给，别给老师出难题，老师一蹙眉你分就没了。最后，性价比不高。mst中其他内容所有篇幅加起来与导数相当，高考导数分值有限，况且真正难的只是压轴的最后一问，就算你把mst东西弄完了在高考的考场上你能保证那道题你能搞出来？就算你能做的很完美，别人只是力所能及的写，你不过比别人多五分左右，但你为了这五分的付出拿去搞弱科涨分岂止五分？mst可以搞，但他不能是主旋律。发布于 2021-10-17 18:16​赞同 70​​156 条评论​分享​收藏​喜欢收起​老周​教师资格证持证人​ 关注我说下自己的观点，别人的不评论首先，受不了他的排版，所以编得再好也要pass其次，解法不具备普遍性发布于 2024-02-04 20:04​赞同​​添加评论​分享​收藏​喜欢

山地标准时间MST时区 (Mountain Standard Time) 和使用它的国家，以及同样处于UTC -07:00的时区 - 时区大全

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- 山地标准时间

(

标准时间

)

Mountain Standard Time

比「世界标准时间 (UTC)」晚7 小时

比「北京时间」晚15 小时

05:02:38 上午

周四, 2024年03月07日

UTC -07:00

MST 在哪些国家/地区被使用？

加拿大 (Canada)

墨西哥 (Mexico)

美国 (United States)

其他使用 UTC -07:00 的时区

MST - 山地标准时间

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实验笔记丨分子间相互作用分析——微量热泳动（MST）技术介绍 - 知乎

实验笔记丨分子间相互作用分析——微量热泳动（MST）技术介绍 - 知乎首发于给科研加点buff切换模式写文章登录/注册实验笔记丨分子间相互作用分析——微量热泳动（MST）技术介绍VeryGenome多组学唯誉智合科技有限公司，提供基于质谱技术的定制检测分析服务本文首发“科研日精进”微信公众号在生命科学领域中，生物分子间的相互作用具有非常重要的作用。通过分子间相互作用分析不仅可阐明细胞生物学事件，而且为疾病发生机制和药物发现提供基础。MST 技术是一种基于检测在温度梯度中的生物分子电泳迁移率的变化而检测生物分子间结合、解离过程，获取分子间相互作用的模式和动力学常数等方面信息的新技术，是近年来发展的研究生物分子相互作用的强有力工具，已广泛应用于生命科学领域研究。原理及应用范围原理微量热泳动是一种表征生物分子特性的光学方法，是粒子在微观温度梯度中的定向运动。生物分子的质量、电荷、水化层和构象发生改变均可导致分子在温度梯度场中运动速度的变化，这种变化可以用来分析分子间相互作用以及各种化学剂量学参数。微量热泳动仪是由德国 nano temper 公司发明的设备，2011 年左右投入市场，可测定生物分子的标记荧光和内在荧光信号。MST工作原理见图1。将波长为 1480 nm 的红外激光照射于荧光激发光路上，通过分色镜照射到毛细管中的样品，样品中的水分子吸收红外光发热而形成温度梯度。MST 仪器通过记录激光器打开前、打开期间和打开后处于温度梯度中的样品内部红外激光照射区域的荧光变化情况，从而实现较短时间的测定。图1 MST工作原理图应用范围（1）蛋白-小分子相互作用分析 1.1 蛋白酶与抑制剂相互作用分析 1.2 细胞膜蛋白活性分析（2）蛋白-肽相互作用分析（3）蛋白-蛋白相互作用分析（4）肽-肽相互作用分析（5）蛋白-核酸相互作用分析（6）核酸适配子-小分子相互作用分析技术优势MST技术将荧光检测的精确性和热泳动的差异性及灵敏性结合起来，提供了一种灵活、稳定和快速检测分子间相互作用的方法，在分析分子相互作用中有独特的优势，不依赖于分子大小、种类的影响，甚至水化层的微小变化也可检测到；可检测溶液中低至pM浓度的分子间相互作用；样品消耗量在μL级；可以在复杂缓冲液中包括血浆和细胞裂解液中进行结合分析；还可以分析结合模式和位点数、蛋白解聚、热力学和酶反应动力学等，是一种强大的详细研究生物分子特征的强有力工具。在生命科学的众多领域已经成功使用MST技术进行了不同生物分子间的相互作用定量分析研究。通过探讨分子间有无结合、结合位点数量、分子间相互作用亲和力等，可为配体、底物、疾病靶点的确定和目标物筛选、浓度分析等提供基础，因此，MST技术在药物筛选、信号转导、分子检测和医学诊断等生命科学领域的应用发展迅速，对推动基础生物医学研究和更好的药物开发有重要作用。样品制备（举例）(1) 取已纯化的300 μL TMV 蛋白液，加入 NHS-647 染料，摇匀后放于冰上，在黑暗中孵育30 min；(2) 将NHS-647染料用column B洗脱，用微量离心管接取标记的蛋白，前三滴加入第一个离心管中，第二管中滴入1 ml 左右的蛋白流出液，第三管、第四管依次接取。-20℃条件保存；(3) 配制16个梯度浓度的待测化合物溶液，然后分别取10 μL等体积的TMV CP与之混合；(4) 使用毛细管吸取混合试样，进行MST实验。 发布于 2021-12-20 16:43生物实验​赞同 11​​4 条评论​分享​喜欢​收藏​申请转载​文章被以下专栏收录给科研加点buff分享实验技巧，软件应用，图像处理，编

最小生成树MST 详解 - 知乎

最小生成树MST 详解 - 知乎切换模式写文章登录/注册最小生成树MST 详解samzhangjy​Think twice, code once.前言最近刚学了最小生成树，于是想趁热打火，先来总结一下~前置芝士图、树的概念、遍历与存储并查集本文章所有代码均以C++编写。最小生成树的概念最小生成树（Minimum Spanning Tree, MST）是一种特殊的图。它具备朴素树的所有性质，但也是一张图中边权最小但经过每个节点的子树。定义 一个有 n 个结点的连通图的生成树是原图的极小连通子图，且包含原图中的所有 n 个结点，并且有保持图连通的最少的边。最小生成树可以用Kruskal（克鲁斯卡尔）算法或Prim（普里姆）算法求出。[1] 大意在一张连通图 G 里，有 n 个节点和 m 条边，第 i 条边的权值为 w_i 。我们设图 G 的最小生成树为 T 。那么，图 G 的最小生成树 T 必须具备以下条件：T 必须包括 G 的所有节点；T 的边数必须等于 n - 1；T 的边权和必须在所有生成树中最小；T 必须为 G 的子图。假设我们有如下的连通图 G（左），那么它的最小生成树 T 如图所示（右）。[2]显然对于图 G，T 的边权和在所有生成树中最小。我们称这样的树为图 G 的 最小生成树（简称MST）。算法我们不妨来介绍两种较为常见的求最小生成树的算法。在介绍算法之前，我们先来看这样一道题目：题目链接：洛谷P3366。题目很容易理解，即求出给定图的最小生成树边权和。那么，我们来看看这些算法吧！Kruskal基本思路Kruskal（克鲁斯卡尔） 是一种贪心策略，类似图论中的Bellman-Ford算法。简单来说，如果我们挑选了 n-1 条较小边，那么显而易见，这 n-1 条边的权值相加也会是一个较小值。按照这种思路，我们可以挑选 n-1 条 G 里面最小的边并将它们相连。但是，你以为这就完了？怎么可能。显然我们上面的做法有一个缺陷：它虽然保证了边权和最小，但是得出的却并不一定是一棵树。相反，它反而有可能得出来一个图（或森林）。我们需要解决这个问题。显然，对于一条 u \leftrightarrow v 的无向边，若点 u 和点 v 已经连通（直接或间接），那么我们就不再需要加入当前边了。对于每次遍历，我们都会对当前边的所到达的节点进行一个排查：如果节点已经连通，则无需加边；否则连接两点。这样一来，我们就剩下一个最重要的问题没解决了：如何判断两个点有没有连通？我们可以使用并查集这个数据结构进行存储和判重。每次判断两点的连通性的时候，我们只需要查询他们的祖先是否相同即可。同理，对于每次连接操作，我们只需要进行并查集的合并操作来合并 u,v 两点即可。参考代码#include

#include

#include

using namespace std;

const int N = 2 * 1e5 + 10;

struct edge { // 存边

int u, v, w;

} e[N];

edge mst[5010]; // 最小生成树

int vtx[5010], k, ans, n, m; // vtx并查集数组，k当前最小生成树节点数，ans边权和

bool cmp(edge a, edge b) {

return a.w < b.w; // 按照边权排序

}

int Find(int x) { // 并查集查找操作

if (vtx[x] == x) return x;

return vtx[x] = Find(vtx[x]);

}

void Union(int u, int v) { // 并查集合并操作

int fu = Find(u), fv = Find(v);

if (fu != fv) vtx[fv] = fu;

}

void kruskal() { // Kruskal最小生成树

for (int i = 0; i < m; i++) { // 遍历所有边

if (Find(e[i].u) != Find(e[i].v)) { // 如果两点没有连接

k++; // MST边数++

mst[k].u = e[i].u, mst[k].v = e[i].v, mst[k].w = e[i].w; // 记录当前边

ans += e[i].w; // 总权重增加

Union(e[i].u, e[i].v); // 连接两点

}

}

}

int main() {

scanf("%d%d", &n, &m);

for (int i = 1; i <= n; i++) vtx[i] = i; // 并查集初始化，祖先都是自己，即每个点都未连接

for (int i = 0; i < m; i++) scanf("%d%d%d", &e[i].u, &e[i].v, &e[i].w);

sort(e, e + m, cmp); // 对边权进行排序

kruskal(); // 获取MST

if (k == n - 1) printf("%d\n", ans); // 如果边数满足条件，输出总权值

else printf("orz"); // 否则输出orz

return 0;

}

Prim基本思路Prim（普利姆） 是Dijkstra的一个扩展。Prim算法与Dijkstra算法唯一的区别在于：Prim算法所记录的距离（dis数组）并非从某个起点到终点的距离，而是当前的生成树到某个点的最短距离。其余部分与Dijkstra算法一致。同样，Prim算法也可以使用堆进行优化，以提高效率。但是，一般我们不推荐在稀疏图上使用Prim堆优化。堆优化后的Prim在稀疏图上的效率与Kruskal类似，但明显Kruskal代码复杂度较低。参考代码#include

#include

#include

#include

using namespace std;

const int N = 5010;

int g[N][N], dis[N]; // 邻接矩阵存图

bool vis[N]; // 是否经过了某个点

int n, m, ans, u, v, w;

void initialize() { // 初始化

memset(g, 0x3f, sizeof(g));

memset(dis, 0x3f, sizeof(dis));

}

void addEdge(int u, int v, int w) { // 添加一条 u <-> v，权值为w的无向边

if (u != v && g[u][v] > w) g[u][v] = g[v][u] = w;

}

void prim() { // Prim

for (int i = 0; i < n; i++) { // 遍历每个点

int k = 0; // 距离最近的点的坐标

for (int j = 1; j <= n; j++) { // 寻找距离点i最近的未访问过的点

if (!vis[j] && dis[j] < dis[k]) k = j;

}

vis[k] = 1; // 标记访问

ans += dis[k]; // 记录权值

for (int j = 1; j <= n; j++) { // 再次遍历每个点，更新最短路

if (!vis[j] && dis[j] > g[k][j]) { // 未访问过且路程比当前记录的小

dis[j] = g[k][j]; // 更新权值

}

}

}

}

int main() {

initialize();

scanf("%d%d", &n, &m);

while (m--) {

scanf("%d%d%d", &u, &v, &w);

addEdge(u, v, w); addEdge(v, u, w);

}

dis[1] = 0; // 约定俗成，从点1跑prim，赋值为0是为了消除自环

prim();

for (int i = 1; i <= n; i++) { // 判断是否建立成树

if (!vis[i]) { // 如果有点未访问，则没有最小生成树

printf("orz\n");

return 0;

}

}

printf("%d\n", ans); // 否则输出权重和

return 0;

}

参考资料最小生成树_百度百科最小生成树的两种方法（Kruskal算法和Prim算法）编辑于 2021-08-24 15:54C / C++最小生成树算法​赞同 9​​添加评论​分享​喜欢​收藏​申请

Mountain Standard Time – MST Time Zone

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Home   Time Zones   Abbreviations   MST – Mountain Standard TimeMountain Standard Time (MST)

Also known as: Mountain Time (MT) and Mountain Daylight Time (MDT)

Currently observing MST.

Areas with same time currently (UTC -7).

Currently observing MST – Mountain Standard Time.

Currently has same time zone offset as MST (UTC -7) but different time zone name.

Mountain Standard Time (MST) is 7 hours behind Coordinated Universal Time (UTC). This time zone is in use during standard time in: North America. See full time zone map

What Is Mountain Standard Time?

Mountain Standard Time is the second westernmost time zone in the United States and Canada. It is also used in Mexico.

It covers all or parts of 13 states in the US and five provinces or territories in Canada.

The MST time zone is the least populated time zone in the USA. It spans from northern Canada to Mexico near the equator.

In North America, Mountain Standard Time shares a border with Central Standard Time (CST) in the east and with Pacific Standard Time (PST) in the west.

Mountain Standard Time Zone

Mountain Standard Time (MST) is a standard time zone in use from the first Sunday in November to the second Sunday in March—when Daylight Saving Time (DST) is not in effect. Mountain Daylight Time (MDT) is used during the remainder of the year.

Some areas in British Coloumbia, including Creston, Fort Nelson, Fort St. John, and Dawson Creek use Mountain Standard Time all year.

MST Is the Mountain Time Zone

In everyday usage, MST is often referred to as Mountain Time (MT) or the Mountain Time Zone. This can add a bit of confusion as the term Mountain Time does not differentiate between standard time and Daylight Saving Time, so Mountain Time switches between MST and MDT in areas that use DST during part of the year.

Most North American time zones also have generic terms, including Pacific Time (PT), Central Time (CT), Eastern Time (ET), and Atlantic Time (AT).

Converting Mountain Time to Other US Time Zones

Mountain Standard Time (MST) is 2 hours behind Eastern Standard Time (EST).

To convert MST to EST, you have to add two hours.

Mountain Standard Time (MST) is 1 hour behind Central Standard Time (CST).

To convert MST to CST, you have to add one hour.

Mountain Standard Time (MST) is 1 hour ahead of Pacific Standard Time (PST).

To convert MST to PST, you have to subtract one hour.

Time Zone Converter: UTC to MST

Where and When is MST Observed?

North America

US states using MST in the winter and MDT in the summer:

Arizona - Navajo Nation only

Colorado

Idaho - most of the state except western counties ShowBenewah, Bonner, Boundary, Clearwater, Kootenai, Latah, Lewis, Nez Perce, Shoshone and north part of Idaho

Kansas - some western counties only ShowGreeley, Hamilton, Sherman and Wallace

Montana

Nebraska - western counties ShowArthur, Banner, Box Butte, Chase, Cheyenne, Dawes, Deuel, Dundy, Garden, Grant, Hooker, Keith, Kimball, Morrill, Perkins, Scotts Bluff, Sheridan, and Sioux and the western part of Cherry

New Mexico

North Dakota - South-Western parts Showcounties of Adams, Billings, Bowman, Golden Valley, Grant, Hettinger, Mercer, Slope and Stark, and southern parts of Dunn and McKenzie, most of Morton and Sioux counties

Oregon - parts of Malheur county only Showrest of Oregon is PST/PDT

South Dakota - western counties ShowBennett, Butte, Corson, Custer, Dewey, Fall River, Haakon, Harding, Jackson, Lawrence, Meade, Pennington, Perkins, Shannon, and Ziebach, and the western parts of Stanley

Texas - a few counties in west ShowEl Paso and Hudspeth and part of Culberson

Utah

Wyoming

Canadian provinces/territories using MST in the winter and MDT in the summer:

Alberta

British Columbia - a few eastern communities ShowCranbrook, Golden, Invermere

Northwest Territories

Nunavut - Kugluktuk, Cambridge Bay only (Other parts use EST/EDT or EST only)

Saskatchewan - only Lloydminster

Mexican states using MST in the winter and MDT in the summer:

Baja California Sur

Chihuahua

Nayarit

Sinaloa

Mexican states using MST all year:

Sonora

US states using MST all year:

ArizonaShowexcept Navajo Nation

Canadian provinces/territories using MST all year:

Some locations in British ColumbiaShowCreston, the Northern Rockies Regional Municipality, and most of Peace River Regional District (except Fort Ware)

Yukon

Other Time Zones in UTC -7Some time zones exist that have the same offset as MST, but can be found under a different name:

PDT – Pacific Daylight Time

T – Tango Time Zone

MST time now

05:02:38Huwebes, 7 Marso 2024

MST will be observed in Edmonton, Denver until 10 Mar 2024, 02:00

UTC Offset: UTC -7

15 hours behind Manila

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Other namesHNR – Heure Normale des Rocheuses (French)

Example citiesCanada – Edmonton (Winter)USA – Phoenix (All Year)USA – Denver (Winter)

Related time zonesMDT – Mountain Daylight Time (Daylight Time)

Time Zone Map with DSTTime Zone Map

Time zones by continent/region

AfricaAntarcticaAsiaAtlanticAustraliaCaribbeanCentral AmericaEuropeIndian OceanMilitaryNorth AmericaPacificSouth America

See all Time zone abbreviationsTime zones ToolsTime Zone ConverterInternational Meeting PlannerEvent Time AnnouncerTime Zone AbbreviationsTime Zone NewsDaylight Saving TimeTime Changes WorldwideTime Difference

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【应用指南】微量热泳动仪MST大解析 - 知乎

【应用指南】微量热泳动仪MST大解析 - 知乎切换模式写文章登录/注册【应用指南】微量热泳动仪MST大解析测试狗科研服务​已认证账号在生命科学领域中，生物分子间的相互作用具有非常重要的作用。通过分子间相互作用分析不仅可阐明细胞生物学事件，且能够为疾病发生机制和药物发现提供基础。微量热涌动（MicroScale Thermophoresis，MST）技术是一种基于检测在温度梯度中的生物分子电泳迁移率的变化而检测生物分子间结合、解离过程，获取分子间相互作用的模式和动力学常数等方面信息的新技术[1]，广泛用于预防医学与公共卫生学、基础医学、临床医学、生物学等生命科学领域的研究，具有无需固定样品、样品用量极小、可在血清、细胞裂解液等生物溶液中直接检测分子相互作用、方便快捷等优点，是近年来新发展出的研究生物分子相互作用的强有力工具。图1 微量热涌仪[2]1. 发展历史微量热涌动仪最初是由德国慕尼黑的高科技公司NanoTemper技术有限公司发明的，2010年底，NanoTemper公司创始人Dr. Stefan和 Dr. Philipp在Nature上发表了文章《Protein-binding assays in biological liquids using microscale thermophoresis》，是最先应用微量热涌动仪的研究，该文章报道了使用MST测量生物溶液中蛋白-蛋白之间的相互作用的成果，引起了科研人员的极大兴趣。在MST仪投入市场后，两年内就有130个实验室购买并使用，相关数据已经发表到Nature，Cell等期刊，使得这种新式测量仪器在短时间内受到了用户们的广泛欢迎。图2 NanoTemper公司创始人Dr. Stefan和 Dr. Philipp2. 工作原理MST仪器的工作原理见图3，波长为1480 nm的红外激光通过分色镜照射到毛细管中的样品，红外激光在5s的时间点打开，样品中的水分子吸收红外光发热而形成温度梯度（~5 K）。通过聚焦的红外激光加热毛细管之中的溶液，同时通过hot mirror来检测荧光。毛细管中的荧光可以通过光学二极管来成像，然后将加热中心的标准化荧光对时间绘图。随后荧光由于温度的增加而降低，荧光分子由于受到热泳动的作用而移出加热中心。通过记录激光器打开前、打开期间和打开后处于温度梯度中的样品内部红外激光照射区域的荧光变化情况，可以在较短时间（约10s）内完成测定。图3 MST工作原理图[3]荧光分子最初是自由均匀分布的，在红外激光照射下，分子受到热泳动的作用力，从加热区域向低温区域移动，同时分子又受到浓度梯度和质量扩散力的作用，最后分子在热泳动作用力和质量扩散作用力下达到平衡，形成稳定态。在关闭红外激光后，分子扩散重建均匀分布状态。整个过程如图3A和B所示。2.1 荧光标记原理在测试过程中，需要通过荧光来检测目标分子的热泳变化，对于Lable Free的MST机型，可以利用蛋白的内源荧光进行检测；对于NT.115等MST机型，则需要对目标分子进行荧光标记实现对分子热泳的检测。NT.115配置通道为 Nano BLUE/RED，相应覆盖的荧光EX-EM范围如图所示：图4 MST各机型荧光通道信息[4]在MST测试中，荧光标记可以在前期目标分子的构建中完成，也可以在提纯得到目标分子后进行标记。对于目标分子是蛋白的样品，可以采用融合荧光蛋白（FP）的荧光标记策略，构建并表达融合荧光蛋白标签（如GFP）的目标分子；对于目标分子是DNA和RNA的样品，可以在引物设计中引入荧光探针（如Cy5），然后通过扩增得到荧光标记的DNA或RNA样品。这种荧光标记的优势在于，可以直接在血清、细胞裂解液等生物样品中直接检测分子相互作用，而无需纯化目标分子。需要注意的是，荧光标记应避免占据分子相互作用的活性结合位点，例如蛋白结构域口袋、DNA的螺旋沟区等。2.2 分子间相互作用分析热泳动行为取决于分子和溶剂之间的界面。一个荧光标记分子A的热泳动由于大小、电荷和溶剂化熵的差异通常明显不同于分子A和靶标T形成的复合物AT。在一定缓冲条件下，可以通过梯度滴定实验测量计算出分子间的结合常数。根据分子扩散的动力学，S、T确定的稳态浓度比例下温度上升，Chot/Ccold = exp(-ST ΔT) ≈ 1-STΔT。归一化荧光Fnorm= F热/F冷= 1 +（∂F /∂TST）。由于荧光强度的线性和热泳枯竭，Fnorm（A）未结合的分子归荧光和约束复杂的Fnorm（AT）发生线性叠加。用x表示绑定到目标分子的一小部分，荧光信号的变化公式如下：Fnorm=(1-x) Fnorm(A)+x Fnorm(AT)。通过约束力基板的连续稀释可以获得定量绑定参数。通过绘制F规范对系列稀释的不同浓度的对数，可以获得一个S形的结合曲线。通过这个曲线，可以解出质量作用定律的非线性解与解离常数。图4 MST计算原理[5]3. 主要功能① 可以应用于任何生物分子间的相互作用分析，获得数据包括亲和力、结合能量学（ΔG，ΔS，ΔH）、化学计量学参数、酶动力学参数、结合位点、抑制物亲和力Ki等。② 可以分析任何溶液中分子间的相互作用（包括细胞裂解液、血清、含去污剂或有机溶剂等各种溶液），结合GFP/YFP/RFP融合蛋白则无需纯化样品，可直接在细胞裂解液中测量分析。③ 应用于多组分反应、协同或抑制因子的叠加效应分析等。④ 可以检测蛋白样品的聚集和分析人为操作带来的误差。4. 样品制备(1) 取已纯化的300 μL TMV 蛋白液，加入 NHS-647 染料，摇匀后放于冰上，在黑暗中孵育30 min；(2) 将NHS-647染料用column B洗脱，用微量离心管接取标记的蛋白，前三滴加入第一个离心管中，第二管中滴入1 ml 左右的蛋白流出液，第三管、第四管依次接取。-20℃条件保存；(3) 配制16个梯度浓度的待测化合物溶液，然后分别取10 μL等体积的TMV CP与之混合；(4) 使用毛细管吸取混合试样，进行MST实验。5. 应用范围（1）蛋白-小分子相互作用分析：蛋白酶与抑制剂相互作用分析、细胞膜蛋白活性分析（2）蛋白-肽相互作用分析（3）蛋白-蛋白相互作用分析（4）肽-肽相互作用分析（5）蛋白-核酸相互作用分析（6）核酸适配子-小分子相互作用分析6. 技术优势（1）样品处理方面：☆ 不需要固定，在生物溶液中测量，无需纯化☆ 无需标记测量☆ 使用荧光染料/荧光蛋白具有良好的选择性☆ 极低的样品消耗量☆ 直接在脂质体或者去污剂中研究膜蛋白☆ 快速简单的实验准备（2）测量数据方面：☆ 10分钟之内测量任何（生物）分子间亲和力(KD， 解离常数)☆ 测量sub-nM到mM 级的解离常数☆ 可以选择特定温度下完成测量☆ 研究各种不同大小的分子：离子、片段、核小体、脂质体☆ 可以在各种不同的溶液环境中完成测量，包括研究膜蛋白所需的复杂的去污剂环境☆ 广泛的样品兼容性：天然的环境中、生理学实验条件、血清、细胞裂解液☆ 可以研究多组分反应：三元复合物、装配顺序、干扰因素、协同作用、类似物☆ 可以区分靶标上不同的结合位点☆ 可以测量生物分子的寡聚化☆ 研究化学计量学并确定生物分子结合位点的数目☆ 研究结合能量学ΔG (自由能 )，ΔH (焓) 和ΔS (熵)☆ 研究蛋白的折叠和稳定性（3）实验操作方面：☆ 非常简单，易操作☆ 实时获得数据☆ 非常稳定的技术（4）维护费用方面：☆ 非常低的运行成本☆ 不需要日常的仪器维护☆ 更快得到数据用于发表文章☆ 仪器小型化设计，占用空间少7. 应用示例7.1 GSTd07促进朱砂叶螨适应植物硒防御机制的研究在分子生物学领域，MST技术已经被广泛应用于蛋白质与小分子相互作用方面的检测。由于小分子物质可通过对结构域的活化位点的竞争结合或者干扰结构域之间的结合，抑制蛋白的功能。因此蛋白质与小分子配体的结合在新药物的探索中扮演着重要的角色。西南大学的戚翠翠在研究朱砂叶瞒适应植物硒防御的机制时就应用微量热涌动实验进行了研究[8]。为探究 GSTd07 重组蛋白如何发挥催化作用，实验将重组蛋白进行荧光标记，利用微量热涌动技术，分别检测了重组蛋白GSTd07与小分子配体（GSH、Na2SeO3）的结合能力。如图5所示，结果发现，在 GSTd07重组蛋白与GSH的反应体系中，加入亚硒酸钠，能促进GSTs与还原型谷胱甘肽的结合，同时也排除了GSTs的H-site会结合亚硒酸钠的可能性。这一发现阐明了GSTd07编码的蛋白可通过增加与还原型谷胱甘肽的结合，从而催化GSH与亚硒酸钠的反应。图5 GSTd07 与 Na2SeO3、GSH 结合的MST分析[8]7.2 桔小实蝇气味结合蛋白的注释及BdorOBP56f-2功能研究桔小实蝇Bactrocera dorsalis (Hendel)是最具破坏性的食果害虫之一，对世界果蔬产业造成巨大经济损失。目前主要的防控措施是使用商业化诱剂进行诱杀，目前广泛应用的商业化诱剂的主要成分为甲基丁香酚（methyl eugenol，ME）。气味结合蛋白（odorant binding proteins，OBPs）是昆虫嗅觉生理过程中的一类重要蛋白，在昆虫嗅觉感受生理功能中起着重要作用，但现阶段关于桔小实蝇OBPs在基因组水平上与ME作用的功能机制尚不清晰。西南大学的陈晓凤系统梳理注释桔小实蝇气味结合蛋白，利用多种技术手段证实BdorOBP56f-2参与桔小实蝇感受ME的过程，其中就采用了微量热涌动技术辅助完成分析研究[9]。由于MST技术能够量化分子在微小温度梯度下的热运动差异，进而分析体系内的结合现象计算出解离常数，由此检测出分子间的亲和能力。因此作者利用 MST 技术对 BdorOBP56f-2 蛋白进行体外亲和能力检测。将蛋白浓度固定，而将气味物质稀释出不同浓度梯度，将两种溶液混合后利用 MST 检测，获得不同浓度下其荧光值的变化，即可定量分析验证结合的真实性，并检测结合能力的强弱。结果如图6所示。经拟合计算可以BdorOBP56f-2与ME、4-Carvomenthenol、Trans-2-henxenal及Diethyl maleate这4种气味物质的结合曲线，其解离常数分别为3.900±1.200 μM、15.412±2.035μM、31.948±6.000 μM、174.250±26.704 μM。因此可以得出结论BdorOBP56f-2的亲和力顺序：ME > 4-Carvomenthenol > Trans-2-henxenal。图6 BdorOBP56f-2与4 种气味物质结合的浓度梯度效应[9]7.3 绿盲蝽四个触角特异气味结合蛋白配体结合特征研究棉田次要害虫绿盲蝽(A. lucorum)数量急剧增加，危害多种经济作物。绿盲蝽嗅觉系统在其寻找寄主、交配及趋避行为中发挥重要作用，深入研究绿盲蝽嗅觉系统对设计绿盲蝽行为调控剂具有重要指导意义。中国农业科学院的刘航玮对绿盲蝽的4个触角特异表达AlucOBPs 进行了克隆、表达和纯化，得到4个AlucOBPs 重组蛋白，结合荧光竞争结合实验和微量热涌动检测技术对AlucOBP21进行平行功能分析，研究了4个重组蛋白与68种配体化合物的结合特征[10]。相对于荧光竞争结合试验，MST技术测得的结合谱更加广泛，结合解离常数更小更加灵敏，试验条件接近原生状态，且特别敏锐，能够作为荧光竞争结合实验补充证明分析结果。作者在文中利用MST技术将AlucOBP21与绿盲蝽最潜在的性信息素及其性信息素类似物、植物挥发物和绿盲蝽驱避剂二甲基二硫醚进行试验，将实验结果与荧光竞争结合试验进行对比，验证MST研究OBP分子功能的优势，测试结果如图7所示。图7 AlucOBP21与配体的MST配体结合试验[10]拟合结果显示AlucOBP21可以与β-石竹烯，β-紫罗兰酮，β-蒎烯，柠檬烯结合，结合常数分别为：0.195±0.0173 μM，0.0492±0.00405 μM，0.702±0.0443 μM，0.399±0.0618 μM。MST计算得到的结合常数远小于荧光竞争结合试验，即在MST试验OBPs分子表现出的结合能力强于荧光竞争结合试验。MST在一定程度上弥补了荧光竞争结合试验的缺点，MST技术运用热涌动原理，对体系内发生的结合现象可以敏锐的发觉，且MST直接测定OBPs与气味分子的接合作用，试验条件更接近蛋白质与气味分子结合的原始环境，所以MST技术比荧光竞争结合试验更加准确。参考资料[1] https://www.ceshigo.com/article/11241.html[2] https://www.ceshigo.com/sycs/707.html[3] https://www.bilibili.com/read/cv14498790/[4] https://zhuanlan.zhihu.com/p/383923392[5] https://www.biomart.cn/experiment/430/599/603/43422.htm[6] https://www.antpedia.com/news/78/n-2343578.html[7] https://zhuanlan.zhihu.com/p/377914016[8] 戚翠翠. GSTd07促进朱砂叶螨适应植物硒防御[D]. 西南大学, 2021. DOI:10.27684/d.cnki.gxndx.2021.003749.[9] 陈晓凤. 桔小实蝇气味结合蛋白的注释及BdorOBP56f-2功能研究[D]. 西南大学, 2020. DOI:10.27684/d.cnki.gxndx.2020.002824.[10] 刘航玮. 绿盲蝽四个触角特异气味结合蛋白配体结合特征研究[D]. 中国农业科学院, 2017.发布于 2023-06-20 09:53・IP 属地四川干货蛋白纯化科研​赞同 4​​1 条评论​分享​喜欢​收藏​申请